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超聲波細(xì)胞破碎儀在植物細(xì)胞中的應(yīng)用

更新時(shí)間: 2011-04-20  點(diǎn)擊次數(shù): 5156次

天然植物藥用成分大多為細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)物,提取時(shí)往往需要將細(xì)胞破碎,而現(xiàn)有的機(jī)械或化學(xué)破碎方法有時(shí)難于取得理想的破碎效果,超聲波在陸地及海洋植物藥用成分的提取中已顯示出了明顯的優(yōu)勢。

1 超聲波作用基本原理

  超聲波在媒質(zhì)中傳播可使媒質(zhì)質(zhì)點(diǎn)在其傳播空間內(nèi)進(jìn)入振動狀態(tài)強(qiáng)化溶質(zhì)擴(kuò)散、傳質(zhì),即超聲波機(jī)械機(jī)制。超聲波在媒質(zhì)質(zhì)點(diǎn)傳播過程中其能量不斷被媒質(zhì)質(zhì)點(diǎn)吸收變成熱能,導(dǎo)致媒質(zhì)質(zhì)點(diǎn)溫度升高,即超聲波熱學(xué)機(jī)制。同時(shí)當(dāng)大能量的超聲波作用于提取介質(zhì),在振動處于稀疏狀態(tài)時(shí),介質(zhì)被撕裂成許多小空穴,這些小空穴瞬時(shí)即閉合,閉合時(shí)產(chǎn)生高達(dá)幾千大氣壓的瞬時(shí)壓力,即空化現(xiàn)象。
  在超聲場中由于被破碎物等所處的浸提介質(zhì)中含有大量的溶解氣體及微小的雜質(zhì),它們包圍在被破碎物等的膠質(zhì)外膜周圍,為超聲波作用提供了必要條件。空化中產(chǎn)生的極大壓力造成被破碎物細(xì)胞壁及整個(gè)生物體破裂,而且整個(gè)破裂過程在瞬間完成,同時(shí)超聲波產(chǎn)生的振動作用加強(qiáng)了胞內(nèi)物質(zhì)的釋放、擴(kuò)散及溶解。超聲波破碎過程是一個(gè)物理過程,浸提過程中無化學(xué)反應(yīng),被浸提的生物活性物質(zhì)在短時(shí)間內(nèi)保持不變,生物活性不減,同時(shí)提高了破碎速度,縮短了破碎時(shí)間,可極大地提高提取效率〔1〕。
  超聲波作用時(shí)其效果不僅取決于超聲波的強(qiáng)度和頻率,而且與被破碎物的結(jié)構(gòu)功能有一定關(guān)系。計(jì)算表明:在水中當(dāng)超聲波輻射面上強(qiáng)度達(dá)3000 W/m2時(shí)就會產(chǎn)生空化,氣泡在瞬間就很快閉合,閉合時(shí)產(chǎn)生的壓力脈沖形成瞬間的球形沖擊波,從而導(dǎo)致被破碎生物體及細(xì)胞的*破裂。從理論上確定被破碎物所處介質(zhì)中氣泡大小后即可選擇適宜的超聲波頻率〔2〕。由于提取介質(zhì)中氣泡尺寸不是單一的,而是存在一個(gè)分布范圍,所以超聲波頻率應(yīng)有一定范圍的變化,即有一個(gè)帶寬。

2 超聲波在植物提取中的應(yīng)用

2.1 陸地植物:超聲波應(yīng)用于生物技術(shù)是一個(gè)較新的研究領(lǐng)域。研究表明,超聲波作用可激活某些酶與細(xì)胞參與的生理生化過程,通過改變反應(yīng)物的質(zhì)量傳輸機(jī)制,提高酶的活性、加速細(xì)胞新陳代謝過程〔3〕。超聲波用于淀粉的降解,可顯著增加淀粉在水中的溶解度而保留明顯的淀粉特征,但超聲波多次處理后酶活性有所降低;超聲波用于降解殼多糖速度快、成本低、氨基酸含量不變;超聲波用于提取真菌多糖,如蟲草多糖、香菇多糖、猴頭多糖等,超聲波酶法與傳統(tǒng)工藝比較提取率高、反應(yīng)過程無物料損失和副反應(yīng);此外超聲波還用于降解提取多種葡聚糖等〔4〕。靈芝多糖是一種實(shí)體木質(zhì)化的真菌多糖,細(xì)胞壁有蛋白質(zhì)、幾丁質(zhì)、纖維素及木質(zhì)素等,其結(jié)構(gòu)緊密,一般的處理方法難于將細(xì)胞壁破壞,有效成分提取困難。通過120 W超聲波作用使其相對結(jié)晶度從23.4降低到0,比表面積增加85.5%,水解速度顯著增加〔5〕。
  目前對超聲波用于從陸地植物中提取藥用有效成分亦進(jìn)行了一些研究。應(yīng)用超聲從大黃中提取蒽醌類成分的研究表明:超聲處理10 min,總提取率可達(dá)95.25 %,而煎煮3 h,總提取率僅為63.27 %;超聲提取20 min,提取率可達(dá)99.82%;用紙層析及HPLC對兩種方法提取產(chǎn)物進(jìn)行分析,表明超聲處理對產(chǎn)物結(jié)構(gòu)無影響〔6〕。在研究從黃連根莖中提取黃連素時(shí),分別對超聲波處理時(shí)間、超聲波頻率及硫酸濃度等進(jìn)行了考察。結(jié)果表明用20 kHz超聲波提取30 min與浸泡24 h提取率相同(8.12 %),核磁共振波譜儀對提取產(chǎn)物研究說明超聲波對黃連素結(jié)構(gòu)無影響〔7〕。用不同頻率的超聲波從槐米中提取蕓香苷與熱堿提取—酸沉淀比較,超聲法無需加熱,只需用頻率20 kHz的超聲波處理30 min,提取率就可提高47.6 %〔8〕。超聲波用于從黃連中提取小檗堿的常規(guī)堿性浸泡工藝中,超聲提取30 min所得到的小檗堿提取率比堿性浸泡24 h高50 %以上〔9〕。中科院化冶所生化工程國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室在承擔(dān)的國家“九.五”攻關(guān)重點(diǎn)項(xiàng)目“植物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)生產(chǎn)青蒿素”中,采用超聲波強(qiáng)化石油醚提取青蒿素,使得提取率增加,提取時(shí)間大大縮短,降低了溶劑消耗,而且提取產(chǎn)物經(jīng)紫外分光光度法和HPLC法檢驗(yàn),表明雜質(zhì)含量亦較少。
2.2 海洋藻類植物:鹽藻含有豐富的β-胡蘿卜素。從鹽中提取β-胡蘿卜素的首要條件是將鹽藻破碎,使β-胡蘿卜素能夠快速、地進(jìn)入水溶液等提取介質(zhì)。由于被提取物多為胞內(nèi)物質(zhì),提取過程中一般需要將細(xì)胞破碎。由于過程中有化學(xué)反應(yīng)發(fā)生,采用化學(xué)破碎方法容易造成被提取物結(jié)構(gòu)性質(zhì)等變化而失去活性,用機(jī)械破碎又難于將細(xì)胞有效破碎。路德明等〔10〕在20℃條件下,分別采用超聲波為30 kHz、150 V,46 kHz、105 V,4.64 kHz、107 V,48.2 kHz、109 V對鹽藻進(jìn)行破碎,通過顯微鏡觀察記數(shù)得到鹽藻的*破碎率可達(dá)87%。藻膽體是某些藻類的捕光色素,藻膽體的光譜性質(zhì)不僅反應(yīng)了其組成和結(jié)構(gòu)特征,而且還可以反應(yīng)藻類物種的差異和進(jìn)化地位。研究藻膽體的光譜性質(zhì)必須得到完整的藻膽體。在采用化學(xué)及機(jī)械破碎方法均不能從龍須藻中獲得理想的藻體時(shí),采用頻率為20~50 kHz,電壓為60 V超聲波處理10 min就得到了完整的藻膽體。超聲波作用的目的是將龍須菜細(xì)胞打破,露出內(nèi)囊體,然后將藻膽體從內(nèi)囊體膜上振動下來〔11〕。
  目前海藻多糖提取一般采用水煮法及乙醇沉淀,回收率很低。中科院化冶所生化工程國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室承擔(dān)的海洋“八六三”青年基金項(xiàng)目“海藻多糖的超聲浸提及凝聚相萃取分離方法研究”,正在研究超聲波用于海藻多糖的破碎浸提過程,并同時(shí)研究解決超聲波應(yīng)用中工程放大問題,以期擴(kuò)大超聲波在海洋活性物質(zhì)提取中的應(yīng)用。

3 結(jié)語

  超聲波在陸地植物和海洋藻類植物天然成分提取中的應(yīng)用已經(jīng)顯示出明顯的優(yōu)勢,并已逐步被人們所注意。目前雖然已進(jìn)行了一些研究,但都是僅在實(shí)驗(yàn)室的很小規(guī)模上,針對某些單個(gè)具體提取對象進(jìn)行簡單的工藝條件實(shí)驗(yàn)。
  在超聲波用于植物天然成分提取時(shí),應(yīng)對其作用機(jī)制進(jìn)行深入研究,以便建立一套較為通用的模型,為不同提取對象操作條件提供依據(jù)。同時(shí)注重有關(guān)工程問題研究,解決超聲提取工程放大問題

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